作者：李青山（太原 ）
中药罗布麻叶是一味传统的平肝息风药。罗布麻属于夹竹桃科植物，有两属三种，即罗布麻属罗布麻，别名红麻（Apocynum venetum Line）；白麻属有两个种：其一为大叶白麻（Poacynum hendersonii(Hook.f.)Woodson），别名为大花罗布麻；其二为白麻（Poacynum pictum(Schrenk)Baill），别名为紫斑罗布麻。罗布麻叶作为治疗高血压的中药已经收载于中国药典，其降脂、抗氧化、保肝、抗抑郁等作用已有报道。市场上罗布麻制剂为药材直接用药或为复方制剂，尚无深入开发的品种。对罗布麻叶已有一定的研究，包括化学成分、药理作用、提取方法等，但尚不够系统。近年来随着心血管疾病发病率的上升，罗布麻叶这味传统的平肝息风药重新大量应用于中医临床，随着罗布麻叶的广泛应用，对罗布麻叶的系统研究更显得意义重大。基于此，本课题组对罗布麻叶的化学、药学、药理学等进行了较为系统的研究。
1.罗布麻叶化学成分的研究
1.1罗布麻（红麻）叶化学成分的研究[1]
本课题采用聚酰胺柱层析，硅胶柱层析，凝胶柱层析和制备薄层色谱分离纯化得到8个化合物。鉴定了其中7个黄酮类化合物。经理化性质测定和波谱解析方法鉴定为：三叶豆苷、金丝桃苷、槲皮素、乙酰异槲皮苷、异槲皮苷、杨梅素。
1.2 大叶白麻叶化学成分的研究
本课题组对大叶白麻叶进行了化学成分的研究，得到15个化合物。鉴定了其中9个黄酮类化合物、3个其它类型化合物，经理化性质测定和波谱解析的方法鉴定为：北美圣草素7-O-葡萄糖苷（Eriodictyol 7-O-glucoside）、槲皮素（Quercetin）、异槲皮苷（Isoquercetin）、槲皮素3-O-槐糖苷（Quercetin3-O-sophoroside）、芦丁（Rutin）、山奈酚（Kaempferol）、三叶豆苷（Trifolin）、紫云英苷（Astragalin）、异鼠李素3- O- 葡萄糖苷(Isorhamnetin3-O-glucoside )、羽扇醇棕榈酸酯（Lupenyl palmitate）、没食子酸(gallic acid)、β-谷甾醇(β-Sitosterol)，其中，山奈酚、三叶豆苷、北美圣草素7-O-葡萄糖苷和没食子酸为首次从大叶白麻叶中分离得到，首次从该植物中分离出以北美圣草素为苷元的黄酮苷类化合物。课题组所分离出的化合物为大叶白麻叶指纹图谱特征峰的确认提供了标准品，为药理活性的筛选提供了样品，为大叶白麻叶质量标准水平的提高奠定了基础，同时也为从药效物质基础的角度区分罗布麻与大叶白麻提供了依据。
2.罗布麻叶有效部位制备工艺研究[2]
以总黄酮量和出膏率为指标，比较了渗漉法、回流提取法和半仿生提取法，结果表明，回流提取法出膏率小，且黄酮成分的提取率大。同时该法方便快捷、所得提取物利于后期纯化处理，利于工业化生产，最终确定以回流提取法对罗布麻叶进行提取。
对回流提取法中影响活性成分和出膏率的各种参数( pH值、提取溶剂浓度)进行单因素考察，并在前面单因素试验基础上，以黄酮量、鞣质量、出膏率为指标，对主要因素进行正交试验考察L9(34)），同时结合成本对各参数进行优化，并进行验证试验，从而确定最优工艺参数。
经过初步的药理筛选，发现罗布麻叶提取物有两个活性部位。活性部位A具有调节血脂活性，该部位的化学成分主要为鞣质和黄酮成分。活性部位B具有NOS抑制剂活性，该部位的化学成分主要为黄酮类物质（从罗布麻叶中获得纯度超过50%的总黄酮有效部位）。由于两个部位分别由不同类型的化合物组成，故本课题组选择不同的纯化方法，分别对两部位进行纯化工艺的考察。
3.罗布麻叶有效部位药理学研究[3]
本课题以心血管药理活性为筛选指标，寻找罗布麻叶的有效部位。
研究表明在同等给药剂量下（相当于药材），粗提物组并没有表现出显著降血脂作用，而各富集部位均显示出了较好的降血脂活性。各富集部位均可减少血液中胆固醇（TC）和低密度脂蛋白（LDL）的含量，减少血脂来源；增加高密度脂蛋白（HDL）的含量，使血脂清除加快，从而恢复体内脂质水平。
其中总黄酮加总鞣质部位与各自比较还具有降低甘油三酯（TG）的效果和更好的保持血中稳定的脂蛋白水平，是罗布麻叶粗提物和单独部位所无法比拟的，体现了中药中复杂成分具有相互作用的特点。
本课题组根据NOS在催化L-Arg（L-精氨酸）氧化分解L-Cit（L-胍氨酸）和NO过程中，同步引起NADPH氧化为NADP+而产生荧光变化。通过荧光检测在反应液中NADPH的消耗（激发光340nm，发射光440nm），从而推断NOS的活性。实验结果表明只有总黄酮富集部位具有NO合酶抑制剂的活性；而乙醇粗提取物和总鞣质富集部位并没有活性。
药理筛选表明罗布麻叶中总黄酮加总鞣质富集部位的调节血脂活性最好，并首次发现总黄酮富集部位还具有NO合酶抑制剂的活性。两部位防治心脑血管疾病的角度不同：总黄酮加总鞣质富集部位是调节体内血脂；而总黄酮富集部位是对已经发生的炎性改变进行纠正。因此考虑分别对它们的有效部位制备工艺进行研究。
通过对经不同的制备工艺值得的两样品（LVA1、LVA2）进行抗血栓的药理活性实验，并寻找其较理想的药效学实验剂量，发现两个样品均有一定抗血栓的趋势，相比之下，LVA1号有效剂量小一些，且使血栓各项指标下降的幅度比LVA2号也要大一些，但与阳性对照药脂脉康胶囊和抗栓胶囊相比较还是有一定差距。
4 不同罗布麻叶的指纹图谱崖研究
4.1不同种属和产地的罗布麻叶的硅胶薄层指纹图谱研究
中药薄层指纹图谱中，最常用的是经典的硅胶薄层。这种方法在中药鉴别、薄层扫描测定含量等方面已经应用多年，技术比较成熟，操作也简便，尤其对于一些极性偏小、中等极性的化合物也具有良好的分离度，目前已经发表的薄层指纹图谱也主要使用这种方法。
分别属于两属三种的19个罗布麻样品，其整体面貌具有相似之处，都出现了斑点3（Rf=0.22，异槲皮苷）、8（Rf=0.65，含量较少）和9（Rf=0.70）。但是罗布麻属与白麻属之间也有明显差异，最主要在于白麻属罗布麻出现了该属特有的特征斑点6（Rf=0.56-57）、7（Rf=0.60-0.61）和11（Rf=0.79-0.80），其中斑点6最具有代表性。而罗布麻属红麻也出现了特有的特征斑点5（芦丁）和12（Rf=0.83-85，呈蓝色荧光）。所以该法也能将药典收载品种红麻（Apocynum venetum Line）与其他两种混淆品鉴别出来，但是对于白麻属两种之间尚不能区别。
对于不同产地的罗布麻样品，经微乳薄层展开分析，发现其在斑点位置和斑点数目方面均基本一致。可能的区别体现在各成分的相对含量上，这需要专门的分析软件加以分析。
本课题组首次尝试将微乳薄层应用于中药指纹图谱研究中。将本法所展开结果与硅胶指纹图谱相比较，可以发现本法展出斑点明显多于后者，而且展出斑点圆整，出现的特征信息也明显多于硅胶薄层指纹图谱，说明微乳薄层对于黄酮类化合物的分离能力优于普通的硅胶薄层，在中草药鉴别中具有广阔的应用前景。
4.2 不同种属和产地的罗布麻叶的HPLC指纹图谱研究
对不同产地的10批红麻药材、不同种属罗布麻叶（红麻样品4批，大叶白麻4批，白麻2批）、白麻属两种（大叶白麻4批，白麻2批 ）的指纹图谱进行了比较。实验结果表明，不同种属的罗布麻叶药材指纹图谱中主要峰面积有明显差异。以红麻对照药材指纹图谱为对照模板，不同产地之间红麻相似度为0.88~1.00，从指纹图谱工作站分析的数据看，主要差异体现在共有峰1和4，由于每一产地的样本量较少，有必要进一步收集大量样本，验证共有峰1和4与产地的关系。
不同种属的罗布麻之间比较的结果表明，红麻出现特征峰2(金丝桃苷，18.8min)、5(35.0min)、6(36.8min)、7(38.1min)、11(46.2min)；而白麻属植物则出现特征峰B1(8.9min)、B2(12.4min)、B3(13.0min)、B4(40.1min)4个可以辨识的白麻属特征峰。其中共有峰1（5.8min）虽然两属植物都存在，但是含量有明显差异（红麻较多），也具有鉴别意义。由于对照品尚没有得到，所以不能将这些特征峰归属。两属植物的指纹图谱面貌有明显差异，软件分析计算两属之间相似度为0.5~0.6。从整体上分析，罗布麻属出现18~38min的特征区，白麻属出现特征性的8.9~20.0min特征区域，而可以容易地把药典收载品种-红麻鉴别出来。
白麻属两种即大叶白麻和白麻之间从HPLC指纹图谱上不能看出存在明显的差异，图谱显示二者在出峰数、出峰时间等方面都极其相似，工作站分析两种之间相似度为0.97~1.00。
本课题组建立了罗布麻叶的HPLC指纹图谱方法，方法学考察符合要求，科学合理。并从不同种属和产地的罗布麻叶的差异入手，建立的找出了其他两种与药典收载品种的区别点，为解决目前市场上的混用问题、进一步规范中药罗布麻叶的质量标准奠定坚实基础。
本部分的研究结果将为中药罗布麻叶的质量控制研究迈出扎实的一步，同时也为规范中药罗布麻叶的种植、采收、临床药用及进一步开发研制新药奠定基础。
参考文献：
1. 程秀丽 中药罗布麻叶中黄酮类化合物提取分离研究 山西医科大学硕士研究生毕业论文。
2. 侯晋军 中药罗布麻叶有效部位制备工艺及其制剂研究 山西医科大学硕士研究生毕业论文。
3. 朱前翔 罗布麻叶提取物降脂作用的研究及罗布麻叶中黄酮类成分的提取、纯化 山西医科大学硕士研究生毕业论文。
4. 韩利文 中药罗布麻叶及其有效部位的质量控制方法研究 山西医科大学硕士研究生毕业论文。
